Studie výkalů za účelem identifikace specifických molekul (antigenů), které jsou přítomny pouze v buňkách Giardia.
Synonyma Rusky
Antigen původce giardiázy.
Synonyma Anglicky
antigen G. lamblia.
Metoda výzkumu
Jednokroková imunochromatografická metoda.
Jaký biomateriál lze použít pro výzkum?
Jak se správně připravit na studium?
Není nutná žádná příprava.
Obecné informace o studiu
Giardia lamblia (syn. Giardia intestinalis, Giardia duodenalis, Lamblia intestinalis) jsou prvoci, kteří parazitují v tenkém střevě a někdy i ve žlučníku a způsobují rozvoj giardiózy. Mohou existovat ve vegetativní formě a ve formě cyst. Po pozření cyst se z nich uvolňují trofozoity schopné rozmnožování a kolonizace tenkého střeva. Část trofozoitů tvoří za určitých podmínek opět cysty, které jsou vylučovány stolicí do vnějšího prostředí.
Cesta infekce je fekálně-orální. Vyskytuje se při pití vody nebo potravin kontaminovaných cystami Giardia, stejně jako prostřednictvím rukou a předmětů pro domácnost kontaminovaných cystami. Zdrojem infekce je pacient s giardiózou nebo asymptomatický nosič. Inkubační doba je 3-42 dní. Giardiáza může být asymptomatická se smrtí patogenu za 1-3 měsíce.
Při klinicky výrazné giardióze, bez ohledu na charakter průběhu infekce (akutní nebo chronické), dominují příznaky průjmu: bolest, nadýmání a kručení v břiše, zvýšená tvorba plynů, častá nažloutlá vodnatá stolice s nepříjemným zápachem. Charakteristická je ztráta chuti k jídlu, zvracení a steatorea – zvýšení množství nestrávených tuků ve výkalech v důsledku porušení jejich absorpce. Vzhledem k rychlé reprodukci Giardia ve střevě se může změnit složení mikroflóry, což vede k dysbakterióze. Mezi extraintestinální projevy giardiázy patří různé alergické dermatózy (nekontrolovatelné svědění kůže, kopřivka, bronchiální astma, eozinofilní plicní infiltráty, blefaritida), artritida a rýma. Příznaky jsou nejvýraznější v obdobích maximální intenzity cystické exkrece.
Děti častěji onemocní, zejména ve věku od 1 do 4 let. U nich je infekce nejzávažnější a normální přírůstek hmotnosti se může zastavit. Mezi vysoce rizikové skupiny pro rozvoj giardiózy patří také cestovatelé, lidé s nízkou úrovní hygieny a sociálního postavení, lidé z uzavřených ústavů (nemocnice, pečovatelské ústavy, věznice), gayové, pacienti s imunodeficiencí a malabsorpcí a také zástupci některých profesí. (pracovníci zoo, školky zvířat).
Z laboratorních metod diagnostiky giardiózy je nejcennější průkaz giardiových antigenů ve stolici a bioptických vzorcích. Je založena na použití protilátek proti celým trofozoitům nebo monospecifických protilátek proti Giardia antigenům o molekulové hmotnosti 65 kD (GSA-65). Pomocí této metody je G. lamblia detekována u 50-70 % pacientů po jednorázové analýze stolice a u více než 90 % pacientů po trojité analýze. Navíc, na rozdíl od stanovení protilátek proti G. lamblia v krvi, dokáže tento test detekovat patogen ve stolici i při absenci výrazné imunitní odpovědi.
K čemu slouží výzkum?
- Identifikovat akutní a chronické formy giardiázy.
- K identifikaci parazitů.
- Pro diferenciální diagnostiku onemocnění s podobnými příznaky, jako jsou bakteriální nebo virové průjmy, zánětlivá onemocnění střev, malabsorpční onemocnění, některé endokrinní poruchy.
- Sledovat účinnost terapie giardiózy (5-6 dní po jejím ukončení).
Kdy je studium naplánováno?
- S průjmem neznámé etiologie.
- Při chronických onemocněních trávicího traktu.
- S dysbakteriózou střev.
- S podvýživou, zaostáváním ve fyzickém vývoji.
- Při kožních onemocněních: dermatitida, kopřivka, ekzém, neurodermatitida.
- S imunodeficiencí.
- S obstrukční bronchitidou a bronchiálním astmatem.
- S alergiemi neznámé etiologie.
- Při vyšetřování osob, které byly v kontaktu s nemocnou giardiózou nebo s přenašečem parazitů.
Co znamenají výsledky?
Referenční hodnoty: negativní.
Výsledky musí být interpretovány ve spojení s dalšími klinickými údaji. Detekce Giardia antigenu ve stolici indikuje přítomnost giardiázy, ale nevylučuje přítomnost jiných patogenních mikroorganismů. Nepřítomnost Giardia antigenu ve stolici s největší pravděpodobností indikuje nepřítomnost giardiázy, ale v některých případech lze antigen detekovat opětovným vyšetřením stolice. Pokud je tedy výsledek negativní, ale existují příznaky infekce, je nutná druhá studie.
Důvody pro pozitivní výsledek
- Akutní nebo chronická giardiáza.
- Nesoucí G. lamblia.
Důvody pro negativní výsledek
- Absence infekce lambliemi.
- Malé množství patogenu ve výkalech.
Důležité poznámky
Největší množství patogenu v těle je pozorováno během prvního týdne po nástupu příznaků giardiázy, proto je nanejvýš vhodné v tomto období vyšetřit vzorky stolice.
Detekce Giardia antigenu ve stolici metodou ELISA ELISA
Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA, synonymum pro anglicky – ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay) se provádí pro rychlou kvalitativní detekci Giardia antigenu ve vzorcích lidské stolice za účelem diagnostiky giardiózy.
giardiasis – onemocnění trávicího ústrojí, původcem je prvokový jednobuněčný organismus Giardia lamblia.
Životní cyklus Giardia sestává ze stadia cysty a vegetativního stadia (trofozoit). Cysty při vstupu do těla obcházejí žaludek a vlivem duodenálního obsahu se v horní části střeva uvolňují pohyblivé trofozoity (jsou schopné rozmnožování a existence v tenkém střevě). Trofozoiti za určitých podmínek ztrácejí svůj tvar a znovu vytvářejí stadium cysty, které je v klidu. Cyklus končí, když se zralé cysty (velikost 12 mikronů a oválné) dostanou s výkaly do vnějšího prostředí a jsou schopny infikovat nového hostitele.
Indikace pro analýzu
- psychosomatické poruchy;
- chronická onemocnění, poškození gastrointestinálního traktu;
- alergické reakce, dermatitida, ekzém, kopřivka;
- dysbakterióza, průjem neznámé etiologie;
- zaostávání ve fyzickém vývoji, podvýživa.
- detekce přenašečů parazitů;
- detekce giardiózy akutních a chronických forem;
- diferencovaná diagnostika onemocnění s podobnými klinickými příznaky (virový nebo bakteriální průjem);
- sledování účinnosti léčby giardiázy (jeden týden po jejím ukončení).
Metodologie analýzy
Pro analýzu není nutná žádná speciální příprava. Je nutné sbírat biomateriál – výkaly. Je umístěn ve sterilní nádobě. Vzorek by měl být odebrán z několika míst v malých množstvích.
Během prvního kultivačního testu protilátky přidané do vzorku přitahují antigeny Giardia nalezené ve stolici. Během druhé inkubace další typ protilátky sevře antigen parazita dohromady. V následné inkubaci jsou odstraněny další protilátky, které nereagovaly s konjugátem a anti-protilátky a peroxidáza. Poté se nenavázané enzymy z materiálu odstraní promytím a přidá se chromogen, který při reakci s enzymovým komplexem a peroxidem získá modrou barvu. Stop roztok inhibuje reakci a barva se změní z modré na žlutou.
Interpretace výsledku analýzy
Interpretace diagnostických výsledků se provádí vizuálně a pomocí kontrolní čtečky.
1.Vizuální.
Pozitivní jamka má tmavší žlutou barvu než negativní jamka. V případě negativního výsledku je barva jamky testovaného vzorku světlejší než žlutá.
2. Ovládání čtečky.
Je nutné vynulovat čtečku. Odečtěte všechny jamky při 450/620-650 nm. Při pozitivním výsledku se absorbance odečte od 0,08 jednotek. OP a výše. To ukazuje na přítomnost Giardia antigenu. Negativní výsledek ukáže absorbanci menší než 0,08 jednotek. OP. To potvrzuje nepřítomnost detekovatelných hladin Giardia antigenu.
Paraziti mají hustší obsah v těle během prvních 7 dnů, od okamžiku, kdy se projeví příznaky giardiózy. V tomto období se doporučuje studovat vzorky stolice.
Co je giardiáza
Giardiáza se týká onemocnění způsobených patogenními prvoky a vyskytujících se s poruchou funkce trávení. K porážce dochází především na úrovni tenkého střeva, kde parazit narušuje procesy parietálního trávení.
V klinice giardiózy vede gastrointestinální syndrom s projevy dyspeptické povahy. Laboratorní diagnostika je důležitou metodou potvrzení patologického procesu, která umožňuje včasnou léčbu onemocnění.
Příčiny giardiózy
Původcem infekce jsou Giardia, což jsou jednobuněční parazité patřící do třídy bičíků. V lidském střevě se mohou vyskytovat ve 2 formách, to znamená ve vegetativní (ve formě trofozoitů) a sporé (ve formě cyst). Trophozoiti žijí v horních částech tenkého střeva.
Parazit má osmotický typ výživy, to znamená, že přijímá potravu natrávenou hostitelem po celém povrchu těla. Taková životně důležitá aktivita Giardia narušuje funkci trávení a vyvolává vývoj patologických příznaků. Ve formě cyst žije Giardia v tlustém střevě a ve vnějším prostředí. Liší se životaschopností a odolností vůči ultrafialovému záření a působení nízkých teplot.
Přenosové trasy
Zdrojem nákazy giardiózou je nemocný člověk nebo přenašeč parazita, který cysty giardie vylučuje se stolicí do vnějšího prostředí. Mechanismus přenosu infekce je fekálně-orální. Nejčastěji dochází k přenosu patogenu prostřednictvím:
- běžné předměty pro domácnost;
- voda z vodovodu infikovaná cystami Giardia;
- nemytá zelenina a ovoce;
- s nedostatečnou tepelnou úpravou potravin;
- při porušování hygienických pravidel zejména v předškolních a školních zařízeních.
Ne poslední místo v přenosu Giardia patří hmyzu (mouchy, švábi), stejně jako zvířatům (kočky, psi). Jsou mechanickými přenašeči parazita, který se nachází na jejich těle, tlapkách, vlně.
Skutečnost infekce Giardií je ovlivněna imunitní reaktivitou střeva. Imunita organismu vůči parazitovi je možná. Cysty, které se dostaly do trávicího traktu a setkaly se s agresivním prostředím střeva, jím projdou a v nezměněné podobě se uvolní ven. Nemoci gastrointestinálního traktu, doprovázené nízkou kyselostí a poklesem enzymatické aktivity, zvyšují riziko infekce.
Klasifikace giardiózy
Giardiové cysty, vstupující do gastrointestinálního traktu, dosahují 12. dvanáctníku a proximálního jejuna, kde přecházejí do vegetativní formy přichycené ke klkům epitelu. Mechanický účinek parazita na střevní sliznici vyvolává narušení vstřebávání, podráždění nervových zakončení střevní trubice, změnu morfologické struktury buněčných struktur střevní výstelky.
V procesu života parazit uvolňuje specifický toxin, který má negativní vliv na nervový systém. Toto působení lamblie mění funkci gastrointestinálního traktu a vyvolává výskyt patologických příznaků. Podle klinických projevů giardiázy se rozlišují následující formy:
- střevní – postupuje s rozvojem duodenitidy, gastroenteritidy, enteritidy, duodeno-žaludečního refluxu, funkční poruchy střev;
- žlučovo-pankreatické – s převahou jevů biliární dyskineze, cholecystitida, cholangitida, reaktivní pankreatitida;
- extraintestinální – probíhá s fenomény neurocirkulační dystonie, asteno-neurotický syndrom, toxicko-alergické projevy.
Giardiáza může mít podle průběhu a závažnosti patologických příznaků akutní nebo chronický průběh.
Příznaky giardiázy
Debut onemocnění nastává 1-3 týdny poté, co Giardia vstoupí do těla a na konci inkubační doby. Vzhledem k tomu, že patogen parazituje ve střevě, klinické projevy v akutní fázi typického průběhu patologie začínají poškozením gastrointestinálního traktu a porušením jeho funkce, které se projevuje následujícími příznaky:
- pocity bolesti střední intenzity – bolest je pozorována nejčastěji v pupku a pravém hypochondriu. Svou povahou to může být křeče, připomínající záchvat apendicitidy nebo tahání;
- dyspeptické poruchy – nevolnost, periodické zvracení, nechutenství, říhání, pocit tíhy v břiše, někdy horečka až subfebrilie;
- porušení stolice – konzistence stolice se stává tekutou, pěnou a vodnatou povahou s nepříjemným zápachem. Frekvence stolice se zvyšuje na 3-5krát denně. Často je průjem nahrazen zácpou.
Akutní fáze parazitární infekce trvá až 1 týden. Na konci tohoto období se mohou klinické příznaky giardiázy zastavit a dochází k samoléčení. Pokud klinika přetrvává, patologický proces přechází do subakutního chronického průběhu.
Masivnost invaze parazitů, trvání a závažnost infekčního procesu ovlivňují stupeň syndromu intoxikace organismu. Může se objevit:
- vliv na centrální nervový systém – deprese nervového systému je doprovázena asteno-neurotickým syndromem (slabost, podrážděnost, nestabilita emočního pozadí, snížená schopnost pracovat);
- dermatologické projevy – vzniká suchost a olupování kůže, objevuje se folikulární keratóza, kopřivka doprovázená svěděním kůže, atopická dermatitida;
- vliv na vizuální analyzátor – projevuje se blefaritidou, konjunktivitidou, cheilitidou (zánětlivý proces, který postihuje červený okraj, sliznici a kůži rtů), které jsou náchylné k dlouhému a trvalému průběhu.
Na pozadí giardiázy pacienti trpící onemocněním dýchacího systému (bronchiální astma, astmatická bronchitida) zaznamenávají trvání exacerbací a zkrácení doby remise.
Diagnóza giardiózy
Vzhledem k tomu, že parazitární infekce je charakterizována řadou klinických projevů, jsou sérologické testy ke stanovení Giardia antigenu ve střevním obsahu na prvním místě v diagnostice.
Včasná detekce parazita v těle a léčba giardiózy umožní zabránit a vyhnout se přechodu onemocnění do chronické formy, odstranit patologické příznaky a obnovit funkci trávicího systému.
