Cytoprotektivní potenciál extraktů z brusinek, brusinek, borůvek / Z. T. Shulgau, A. M. Zhulikeeva, Shyngys Daulekhanuly Sergazy [a další]. — Text: bezprostřední // Mladý vědec. — 2020. — Č. 18 (308). — S. 208-213. — URL: https://moluch.ru/archive/308/69392/ (datum přístupu: 07.11.2023/XNUMX/XNUMX).
Článek studoval cytoprotektivní účinky polyfenolických extraktů z brusinek, borůvek a brusinek na buněčné kultury in vitro. Bylo stanoveno polyfenolické složení extraktů z brusinek, borůvek a brusinek ze severozápadní oblasti západní Sibiře, nejvyšší koncentrace polyfenolických složek byla stanovena u extraktu z borůvek. U všech extraktů severních plodů byl v experimentech in vitro odhalen cytoprotektivní potenciál závislý na koncentraci polyfenolů.
Klíčová slova: polyfenol, antioxidant, cytoprotektor.
Biologicky aktivní produkty z bobulí mohou mít terapeutickou hodnotu a lze je využít nejen v doplňkové či alternativní medicíně, ale také v tradiční medicíně. Mezi bobulemi, které jsou nejintenzivněji studovány, zaujímají zvláštní místo tmavě zbarvené severní bobule, jmenovitě brusinky, borůvky, brusinky, protože vyhlídky na získání účinných léků nebo biologicky aktivních potravinářských přídatných látek z nich jsou nejzřetelnější, soudě podle přítomnosti velké množství důkazů v experimentech a klinikách [1].
Terapeutický potenciál severních bobulí, zejména brusinek, borůvek a brusinek, je spojen s jedinečně vysokým obsahem polyfenolických látek [2]. Je známo, že polyfenoly jsou syntetizovány rostlinami jako sekundární metabolity a jsou určeny jako ochranné mechanismy proti stresorům, včetně různých patogenů [3].
Na základě analýzy experimentálních dat popsaných v dostupné literatuře, naznačujících pravděpodobnost vysokého antioxidačního a cytoprotektivního potenciálu severních bobulí a možnost změny průběhu řady patofyziologických procesů v modelech patologie související s věkem, následující pracovní byla formulována hypotéza. Polyfenolické extrakty ze severských plodů (brusinky, brusinky, borůvky) mohou mít díky vysokému obsahu polyfenolů v jejich složení antioxidační a cytoprotektivní vlastnosti a omezovat projevy oxidačního stresu.
Účelem studie bylo studovat cytoprotektivní účinky polyfenolických extraktů z brusinek, borůvek a brusinek na buněčné kultury. in vitro.
Materiály ametody výzkumu
Vodno-alkoholové extrakty byly získány z brusinek, borůvek, brusinek, sbíraných v období léto-podzim roku 2015 v okrese Surgut v okrese Chanty-Mansijsk v oblasti Ťumeň v Ruské federaci. Pro studii byly použity jak primární extrakty z bobulí, tak jejich verze standardizované na fenolické číslo. Vodno-alkoholický extrakt byl zahuštěn odpařením ve vakuu (7 g) v rotační odparce k odstranění alkoholu. Standardizace byla provedena podle celkového fenolického čísla – 10 mg/ml.
Koncentrace polyfenolů ve vzorcích byla studována pomocí komerční soupravy pro stanovení koncentrace polyfenolů „Polyphenols folin-ciocalteu (řada ENOLOGY od BioSytems, Španělsko)“. Koncentrace jsou vyjádřeny v mg/l ekvivalentu kyseliny gallové na základě standardní křivky vytvořené pro kyselinu galovou. Celkové množství monomerních anthokyanů (anthokyanin, ANC) bylo měřeno pomocí spektrofotometrické metody [4].
Obsah fenolických sloučenin byl analyzován vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií za použití chromatografu Agilent 1290 Infinity. Identifikace fenolických sloučenin byla provedena v souladu s retenčními časy a absorpčními spektry odpovídajících analytických standardů [5–7]. Kvantitativní charakterizace obsahu jednotlivých sloučenin byla provedena pomocí kalibračních křivek pro odpovídající standardní vzorky.
Potenciální cytotoxicita a pravděpodobné cytoprotektivní vlastnosti extraktů severních bobulí byly hodnoceny v MTT testu na primární kultuře králičích alveolárních makrofágů a kontinuální buněčné kultuře HEK293 (lidská embryonální ledvina, ATCC® CRL-1573™) – lidské embryonální ledvinové buňky.
Po sčítání buněk králičích alveolárních makrofágů byla suspenze zředěna kultivačním médiem tak, aby ve finálním ředění byl počet buněk v suspenzi 1×10/ml, poté byla buněčná suspenze přenesena do 6jamkových kultivačních destiček, 24 ml na jamku a inkubováno v CO2– inkubátor při 37 °C po dobu 30 minut. Poté, co se makrofágy připojily ke dnu destičky, bylo výchozí médium vyměněno za čerstvé teplé médium (37 °C), přičemž se z kultury odstranily nepřipojené cizí buňky. Do jamek byly přidány testované sloučeniny (0,1 ml): extrakty z brusinek, borůvek a brusinek v ředěních 1:10 a 1:100; doxorubicin v konečných koncentracích 1 μg/ml a 10 μg/ml; doxorubicin 10 mcg/ml + extrakty z brusinek, brusinek, borůvek (ředěno 1:100); kontrola – buňky bez přídavku testovaných látek (0,1 živného média). Inkubováno při 37 °C v atmosféře CO2 (5 %) po dobu 2 hodin. Životaschopnost buněk v kontrole (buňky bez přidaných extraktů) byla brána jako 100 %. Pro každou koncentraci byly experimenty provedeny trojmo. Počet pokusů byl 5 (bylo odebráno 5 králíků).
Buňky HEK293 byly pěstovány v DMEM doplněném 10% fetálním bovinním sérem, 2mM L-glutaminem, 1% gentamicinem při 37 °C v atmosféře CO2 (5 %). Po 48 hodinách byly buňky naočkovány do 96jamkové destičky v množství 100 μl buněčné suspenze na jamku (10 4 buněk v každé jamce), umístěny do CO2-inkubátor. K buněčné kultuře byly přidány testované sloučeniny (extrakty z brusinek, borůvek a brusinek v ředění 1:10 a 1:100; doxorubicin v konečné koncentraci 1 μg/ml a 10 μg/ml; doxorubicin 10 μg/ml + extrakty brusinky, brusinky, borůvky (ředění 1:100), kontrola – buňky bez přídavku testovaných látek, a poté byly buňky kultivovány za stejných podmínek po dobu 48 hodin. Pro každou koncentraci byly experimenty provedeny trojmo. Počet experimentů: 5 (bylo použito 5 vzorků buněčných kultur v různých časech).
Výsledky výzkumu ajejich diskuse
Koncentrace polyfenolů v extraktu z brusinek byla 8723 ± 304 mg/l, v extraktu z brusinek – 4930 ± 152 mg/l, v extraktu z borůvek – 17610 ± 811 mg/l. Získaná data ukazují, že nejvyšší koncentrace polyfenolů je přítomna v extraktu z borůvek, o něco nižší v extraktu z brusinek a výrazně nižší v extraktu z brusinek.
Složení polyfenolických složek hydroalkoholových extraktů borůvek, brusinek a brusinek je podrobněji uvedeno v tabulkách 1 a 2.
Složení fenolických sloučenin vextrakty ze severních plodů (borůvky, brusinky, brusinky), mg/l
